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      福爾根DNA染色液說明書

      更新時間:2022-01-24點擊次數(shù):1152

      產(chǎn)品簡介:
      脫氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen 法、甲基綠-派洛寧法、吖啶橙熒光法等,其中經(jīng)典的是Feulgen 法, 該法是一種經(jīng)典的酶組織化學(xué)法。
       Feulgen Stain 原理在于DNA 經(jīng)溫和的弱酸(例如鹽酸)水解后,嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開,并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開,在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。醛基在原位與Schiff 試劑結(jié)合,形成紫紅色化合物,使細胞內(nèi)含有DNA 的部位呈紫紅色,紫紅色的產(chǎn)生是因為反應(yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)有醌基(醌基是一個具有顏色的發(fā)色團,    所以凡含有DNA 的部位就呈紫紅色,該水解作用不影響核糖-嘌呤結(jié)合鍵,因此RNA 用此法處理后則分解,所以該法不適用于證明RNA。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途

      產(chǎn)品組成:

              

      名稱

       

      3×50ml

       

      Storage

      試劑(A): Schiff Reagent

      50ml

      4℃ 避 光

      試劑(B): SO2 水

      B1: 弱酸溶液

      50ml

      RT

      B2: 亞硫酸鹽溶液

      50ml

      RT

      使用說明書

      1 份

      自備材料:

      1、蒸餾水、系列乙醇

      2、恒溫箱


      操作步驟(僅供參考):

      (一)石蠟切片染色

      1、 組織固定:Carnoy 固定石蠟切片較好,10%福爾馬林亦可,不宜采用 Bouin 固定液。

      2、 配制弱酸工作液: 按弱酸溶液:蒸餾水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸餾水, 充分混合,即獲得弱酸工作液。

      3、 石蠟切片二甲苯或  脫蠟透明液脫蠟至蒸餾水。

      4、 入弱酸工作液室溫浸洗一下。

      5、 切片入預(yù)熱至 60℃的弱酸工作液,孵育 8min。

      6、 切片入室溫的弱酸工作液中沖洗 1min,蒸餾水沖洗。7、 切片入 Schiff Reagent,室溫避光染色 30~60min。

      8、 在上述染色過程中,配制 SO2 水工作液。按弱酸溶液:亞硫酸鹽溶液:蒸餾水=1:5:

      94 配制,即取弱酸溶液 1 份、亞硫酸鹽溶液 5 份、蒸餾水 94 份,充分混合,即配即用。

      9、 用新鮮配制的 SO2 水工作液洗切片 3 次,每次 90s。

      10、 蒸餾水中洗凈,經(jīng)系列乙醇脫水,二甲苯或  脫蠟透明液透明并封片。(二)冰凍切片染色

      1、 冰凍切片預(yù)處理:取 1 份乙酸、3 份無水乙醇混合即為固定液,固定 10min。

      2、 由無水乙醇脫水—逐級下行—蒸餾水。

      3、 配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸餾水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸餾水, 充分混合,即獲得弱酸工作液。

      4、 余下步驟同上述石蠟切片染色。

      陰性對照:將同樣切片經(jīng)上述步驟, 只有步驟 5 改為入室溫弱酸工作液,孵育 15min。結(jié)果為細胞核 DNA 陰性。

      注意事項:

      1、 水解時間很重要,并且應(yīng)使用恰當(dāng)?shù)墓潭〞r間。不同的固定液水解時間不一樣。

      固定液

      水解時間(min)

      Carnoy 固定液

      8min

      Helly 固定液

      8min

      Susa 固定液

      18min

      福爾馬林

      8min

      Zenker 液

      5min

      2、 注意 Schiff Reagent 的純凈程度,若變淺粉紅亦可考慮使用,顏色變紅則棄用。3、 去除切片上多余 Schiff Reagent 的方法以 SO2 水洗為好。

      4、 應(yīng)做陰性對照試驗。

      有效期:6 個月有效。