ELISA試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中藥物的殘留量。
ELISA試劑盒的樣品收集、處理及保存方法:
1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3、細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5、保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。-20℃取出后建議放入2~8℃冰箱中解凍約,每隔一段時(shí)間輕輕搖晃均勻,不可直接放入溫度較高處解凍,避免因溫度改變太大,造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,血清的質(zhì)量下降。若短期無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝,再放回冷凍,避免反復(fù)凍融。4℃長(zhǎng)時(shí)間保存后血清中的變性脂蛋白及纖維蛋白,形成絮狀物質(zhì)變差。
在成批手藝檢測(cè)中,還應(yīng)留神操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異,使抗原抗體反響和酶促反響時(shí)間不一致,對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大,不留神可能會(huì)導(dǎo)致過(guò)錯(cuò)效果或定量不準(zhǔn)。