技術(shù)文章
Technical articles產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
原卟啉(Protoporphyrin IX)分子量為 562.66,CAS 號(hào)為 553-12-8,在生物體內(nèi)原卟啉的含量可間接反應(yīng)鐵的缺乏與否。原卟啉(FEP)檢測(cè)試劑盒(熒光比色法)是利用酸化液破壞紅細(xì)胞并提取原卟啉(FEP),后者在紫外線(xiàn)照射下會(huì)發(fā)出熒光,可通過(guò)熒光分光光度計(jì)等測(cè)定 FEP 含量,該試劑盒主要用于檢測(cè)人、動(dòng)物血液的紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉(FEP)的測(cè)定,反映缺鐵性貧血的程度,但應(yīng)事先或者事后檢測(cè)相應(yīng)的紅細(xì)胞比容。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
試劑(A): 肝素鈉溶液(125U/ml) 0.5ml -20℃
試劑(B): 原卟啉Ⅸ標(biāo)準(zhǔn)(5mg/L) 1ml -20℃ 避光
試劑(C): FEP 酸化液 2×100ml RT
使用說(shuō)明書(shū) 1 份
自備材料:
1、 生理鹽水
2、漩渦振蕩器、離心機(jī)
3、熒光分光光度計(jì)
操作步驟(僅供參考):
1、配制肝素抗凝全血:按新鮮全血:肝素鈉溶液(125U/ml)=9:1 配制。
2、配制原卟啉Ⅸ標(biāo)準(zhǔn)工作液(50μg/L): 室溫溶解原卟啉Ⅸ標(biāo)準(zhǔn)(5mg/L),取 10μl 加至990μl 的 FEP 酸化液,混勻,即為原卟啉Ⅸ標(biāo)準(zhǔn)工作液(50μg/L),4℃可保存 1 周。
3、按下表進(jìn)行操作,并以生理鹽水作為空白對(duì)照
空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 待測(cè)管
肝素抗凝全血 — — 0.05
原卟啉Ⅸ標(biāo)準(zhǔn)工作液(50μg/L) — 0.05 —
生理鹽水 0.05 — —
FEP 酸化液(ml) 3.5 3.5 3.5
4、置于漩渦振蕩器上振蕩 2~3min,3000 r/min 離心 6min,取上清。
5、熒光分光度計(jì)進(jìn)行熒光度測(cè)定(激發(fā)濾片 400nm,發(fā)射濾片 600nm),以空白管作為調(diào)零點(diǎn),標(biāo)準(zhǔn)管校熒光強(qiáng)度并調(diào)至 100,讀取待測(cè)管的熒光強(qiáng)度讀數(shù)(Fu )。
6、另用該肝素抗凝全血測(cè)紅細(xì)胞比容(PCV ),紅細(xì)胞比容常采用臨床檢驗(yàn)科的血細(xì)胞自動(dòng)分析儀進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果計(jì)算:FEP(μg/L,RBC)=35×(Fu/PCV )
參考區(qū)間: 正常人: (398.4±131.7)ug/L RBC
注意事項(xiàng):
1、 整個(gè)操作均應(yīng)在避光條件下進(jìn)行,并盡快完成。
2、 原卟啉在強(qiáng)光下易分解,收集好的血液樣本應(yīng)立即 4℃避光保存,24h 以?xún)?nèi)用完。
3、 熒光強(qiáng)度會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸衰退,但 2h 以?xún)?nèi)基本穩(wěn)定。
4、 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:6 個(gè)月有效。