產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

膽固醇(Cholesterol)又稱膽甾醇，是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，分子式 C₂₇H₄₆O，

分子量為 3860.65，膽固醇廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)，其中腦、神經(jīng)組織豐富，在腎、脾、皮

膚、肝和膽汁中含量也較高。

      總膽固醇(TC)檢測(cè)試劑盒(鄰苯二甲醛比色法)檢測(cè)原理是膽固醇及其脂在強(qiáng)酸存在下與鄰苯二甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紫紅色化合物，該化合物在 550nm 波長處有大吸收峰，分光光度計(jì)在 550nm 處進(jìn)行比色測(cè)定，膽固醇含量在 4mg/ml 之內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。本試劑盒用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織等樣本中的總膽固醇含量定量測(cè)定，其優(yōu)點(diǎn)是：1、操作簡(jiǎn)便；2、靈敏；3、穩(wěn)定；4、無需將膽固醇單獨(dú)抽提出來或去除樣品中的蛋白質(zhì)。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

  產(chǎn)品組成：

試劑(A): 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)     1ml 4℃ 避光

試劑(B): TC Assay Buffer            100ml RT

試劑(C): 鄰苯二甲醛粉劑            2×10mg 4℃ 避光

試劑(D): 鄰苯二甲醛稀釋液          30ml RT

使用說明書 1 份

自備材料：

1、 蒸餾水

2、 生理鹽水或 PBS

3、試管或離心管

4、 濃硫酸

5、 分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考)：

1、 樣本處理：

①血清、血漿、腦脊液樣本：從待測(cè)樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，直接檢測(cè)，如

超過線性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測(cè)。

②細(xì)胞樣本：

a、取適量的細(xì)胞(一般推薦>10⁶ 以上)，1000g 離心 10min，棄上清，留取沉淀。

b、用 PBS 或生理鹽水清洗 1~2 次，1000g 離心 10min，棄上清，留取沉淀。

c、加入 200~300μl 的 PBS 或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率 300W，每

次 3~5s，間隔 30s，重復(fù) 3~5 次。亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用 1~2%

Triton X-100 冰浴 30~60min，制備好的裂解液不可離心。

③組織樣本：準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水=1：4 的比例，加入生理鹽水，

冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿，2500~3000g 離心 10min，取上清待用。

2、配制膽固醇標(biāo)準(zhǔn)工作液：按膽固醇標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)：TC Assay Buffer=1：9 的比例準(zhǔn)確

混合，即為膽固醇標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.1mg/ml)，然后按下表依次稀釋膽固醇標(biāo)準(zhǔn)工作液。

加入試劑(ml)/管號(hào)                      0     1     2     3     4

膽固醇標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.1mg/ml)     0 0.06 0.12 0.18 0.24

TC Assay Buffer                         0.24 0.18 0.12 0.06 0

總膽固醇濃度(mg/ml)                  0     1    2     3     4

3、配制鄰苯二甲醛工作液：取 1 瓶(10mg)鄰苯二甲醛粉劑的準(zhǔn)確加入鄰苯二甲醛稀釋液

10ml，充分混勻，即為鄰苯二甲醛工作液。4℃避光保存，2 周有效。

4、配制強(qiáng)酸工作液：取適量的 TC Assay Buffer 和濃硫酸等量混合，即為強(qiáng)酸工作液。注

意：本試劑盒不提供濃硫酸，需用戶自備，二者混合時(shí)一定小心操作，以免誤傷自己，配制

好的強(qiáng)酸工作液中的硫酸含量應(yīng)準(zhǔn)確，否則有可能影響顯色效果。

5、膽固醇加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注

意避免產(chǎn)生氣泡。

加入試劑(ml)                                空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管

蒸餾水                                              0.006 0.006     -

系列膽固醇標(biāo)準(zhǔn)工作液(0~4 號(hào))            -      0.24      -

待測(cè)血清或其他樣本                          -          -      0.006

TC Assay Buffer                                     0.24  -       0.24

鄰苯二甲醛工作液                                  0.12   0.12    0.12

強(qiáng)酸工作液                                             2.4      2.4       2.4

6、膽固醇測(cè)定：充分混勻, 靜置 10min，1cm 比色杯，以分光光度計(jì)測(cè)定 550m 吸光度，

以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和各待測(cè)管的吸光度。

計(jì)算：以系列膽固醇濃度(0~4 號(hào))為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以

測(cè)定管的吸光度照標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待測(cè)樣本的濃度。

注意事項(xiàng)：

1、 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

2、 本法可直接用于檢測(cè)腦脊液中的 TC 含量，也可直接檢測(cè)尿液中的 TC 含量。

3、 待測(cè)樣本如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。

4、 如果樣本 TC 濃度過高，結(jié)果可能呈假性降低，應(yīng)用生理鹽水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀

釋倍數(shù)。

有效期： 6 個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。